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技術(shù)專欄

免疫分析技術(shù)

利用抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)檢測各種物質(zhì)(藥物、激素、蛋白質(zhì)、微生物等)的分析.主要集中在以下幾方面:(1)實驗藥物動力學(xué)和臨床藥物學(xué)中測定生物利用度和藥物代謝動力學(xué)數(shù)等;(2)在藥物的臨床檢測中,監(jiān)測藥物血液濃度;(3)在線監(jiān)測藥物生產(chǎn)中有效組分的含量;(4)對藥品中特定的微量有害雜質(zhì)進行評價。

免疫分析分類

非標記免疫分析技術(shù):免疫擴散、免疫電泳

標記的免疫分析技術(shù):酶免疫分析、放射免疫分析、其它免疫分析法(熒光免疫技術(shù)、膠體金免疫技術(shù)、發(fā)光免疫技術(shù)和鐵蛋白免疫技術(shù)等)

免疫擴散

基本原理:可溶性的抗原和相應(yīng)的抗體在溶液或凝膠中彼此接觸,形成不溶性抗原-抗體復(fù)合物沉淀。

單向免疫擴散(Single immunodiffusion)

基本原理:指抗原和抗體兩 種成分中只有一種擴散,另 一種被固定在凝膠中。

雙向免疫擴散(Double immunodiffusion)

基本原理:指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在瓊脂介質(zhì)中相互擴散,彼此相遇后形成一定類型的特異性沉淀線。

電泳技術(shù)分類

基本原理:免疫擴散與電泳技術(shù)相結(jié)合。

類型:對流免疫電泳、火箭免疫電離、免疫電泳、雙向免疫電泳(交叉免疫電泳)

對流免疫電泳

基本原理:多數(shù)蛋白質(zhì)抗原在堿性緩沖液中帶負電荷,在電泳時從負極向正極移動?贵w在堿性緩沖液只帶微弱的負電 荷,且相對分子質(zhì)量較大,電泳力較小,在瓊脂電滲力作用 下由正極向負極移動。結(jié)果抗原和抗體定向?qū)α,在兩孔間 相遇時發(fā)生反應(yīng),并在比例合適處形成肉眼可見白色沉淀線。

火箭免疫電泳(Rocket immunoelectrophoresis)

基本原理:也稱免疫擴散,抗原在含有定量抗體的瓊脂糖中泳動,兩者比例適宜時,在較短時間內(nèi)生成錐形的沉淀峰。在一定濃度范圍內(nèi),沉淀峰的高度與抗原含量成正比。

免疫電泳

基本原理:先將待側(cè)樣本作瓊脂凝膠電泳,各蛋白抗原組分被分成不同的區(qū)帶,然后與電泳方向平行挖一小槽,加入相應(yīng)的抗血清,把分成區(qū)帶的蛋白抗原成分作雙向免疫擴散,在各區(qū)帶相應(yīng)的位置形成沉淀弧。 

標記技術(shù)分類

基本原理:采用熒光素、同位素或酶等示蹤物質(zhì) 標記抗體(或抗原)進行抗原 -抗體反應(yīng),通過對免疫復(fù)合物中的標記物的測定,達到對免疫反應(yīng)進行監(jiān)測的目的。

標記免疫技術(shù)主要類型:放射免疫技術(shù)、酶免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù)、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)

放射免疫標記技術(shù)(RIA

基本原理:根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理,以放射性同位素標記抗原或抗體,根據(jù)射線的多少定性或定量測定待檢標本中抗體或抗原的量。

酶免疫標記技術(shù)(ELISA

基本原理:指酶標記抗體或酶標記抗體進行的抗原抗體反應(yīng),然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),用于定量測定。

熒光免疫分析(FIA

基本原理:以熒光素標記抗體或抗原作為示蹤劑的一種新的免疫分析技術(shù),其原理與ELISA相似。該法既可對液體中的抗原和抗體定量,也可對組織切片中的抗原、抗體進行定性和定量。一般由于樣品、試劑的自身熒光和激發(fā)光的散射,本底熒光高,影響了測定的靈敏度。一般以鑭系元素作為熒光標記(示蹤劑)。示蹤劑與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,借助熒光檢測儀察看熒光現(xiàn)象或測量熒光強度,從而判斷抗原或抗體的存在、定位和分布情況或檢測受檢標本中抗原或抗體的含量。

膠體金免疫技術(shù)(CGIA 

基本原理:以膠體金作為示蹤標記物,主要利用了金 顆粒具有高電子密度的特性 ,在金標蛋白結(jié)合處,在顯 微鏡下可見黑褐色顆粒,當 這些標記物在相應(yīng)的配體處 大量聚集時,肉眼可見紅色 或粉紅色斑點。

化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)(CLIA 

基本原理:利用化學(xué)或生物發(fā)光系統(tǒng)作為抗原抗體反應(yīng)的指示系統(tǒng),借以定量檢測抗原或抗體的方法,發(fā)光物質(zhì)可直接作為抗原抗體的標記物,也可以游離形式用于催化劑(酶)和輔助劑標記的抗原或抗體的發(fā)光反應(yīng)中。

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